Description: SNAP-Vista® GreenisagreenfluorescentsubstratethatcanbeusedtolabelSNAP-tag
® fusionproteins(incelllysatesorpurifiedproteins)fordetectionbySDS-PAGE.Thissubstrate(BG-VistaGreen)isbasedonfluoresceinandisoptimizedforexcitationwiththe488nmlaserexcitationlineinalaserbasedgelscanner.Itcanalsobeexcitedusing360nmlightfromastandardUV-trans
Illumina tor.Ithasanexcitationmaximumat500nmandemissionmaximaat524nm.Thispackageincludes50nmolofSNAP-VistaGreensubstrate,sufficienttolabelonehundred20µlsamplescontainingSNAP-tagfusionproteinforin-geldetection.
TheSNAP-tagproteinlabelingsystemenables thespecific,covalentattachmentofvirtuallyany moleculetoaproteinofinterest.TheSNAP-tag isbasedonhumanO
6 -alkylguanine-DNA-alkyltransferase (hAGT).SNAP-tagsubstratesare
fluorophores,biotinorbeadsconjugatedtoguanine orchloropyrimidineleavinggroupsviaabenzyl linker.Inthelabelingreaction,thesubstitutedbenzyl groupofthesubstrateiscovalentlyattachedtothe SNAP-tag.
Therearetwostepstousingthissystem:subcloningandexpressionoftheproteinofinterestasaSNAP-tagfusion,andlabelingofthefusionwiththeSNAP-tagsubstrateofchoice.ExpressionofSNAP-tagfusionproteinsisdescribedinthedocumentationsuppliedwithSNAP-tagplasmids.ThelabelingofthefusionproteinswiththeSNAP-tagsubstratefordetectionbySDS-PAGEisdescribedinthisdocument.
Figure1: Excitation(dottedline)andemissionspectraofSNAP-VistaGreencoupledtoSNAP-taginbufferatpH7.5. Figure2: TypicalSDS-PAGEgelfromagelscanner(MolecularDynamicsStormImager,488nmexcitation) Lane1fluorescentMWMarker Lane2-4SNAP-His(22kD)0.1,0.5,1.0µg Lane5-7SNAP-CyA(40kD)0.1,0.5,1.0µg Lane8-10MBP-SNAP(63kD)0.1,0.5,1.0µg Figure3: StructureofSNAP-VistaGreen(MW628.6g/mol)Notes: Storage:Storesubstrateat-20°C.AfterdissolvingSNAP-VistaGreenstoreitinaliquotsat-20°Cinthedarkforuptothreemonths.Onceanaliquotisthaweditcanbestoredat4°Cinthedarkforuptotwoweeks.Makesuresubstrate,whichmayprecipitateduringfreezing,iscompletelyredissolvedbeforeuse.Withproperstorageat-20°C,thissubstrateshouldbestableforatleastthreeyearsdry,orthreemonthsdissolvedinDMSO.
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