Description: CLIP-Surface™547isaphotostableredfluorescentsubstratethatcanbeusedtolabelCLIP-tag™fusionproteinsonthesurfaceoflivingcellsor
invitro .Thiscellimpermeablesubstrate(BC-547)isbasedontheDyomicsdyeDY-547andissuitableforusewithstandardTAMRAorCy3filtersets.Ithasanexcitationmaximumat554nmandemissionmaximumat568nm.Thispackageincludes50nmolofCLIP-Surface547substrate,sufficienttomake10mlofa5µMCLIP-tagfusionproteinlabelingsolution.
TheCLIP-tag™proteinlabelingsystemenablesthespecific,covalentattachmentofvirtuallyanymoleculetoaproteinofinterest.CLIP-tagisaproteintagbasedonhumanO
6 -alkylguanine-DNA-alkyltransferase(hAGT).CLIP-tagsubstratesarederivativesofbenzylcytosine(BC).Inthelabelingreaction,thesubstitutedbenzylgroupofthesubstrateiscovalentlyattachedtothereactivecysteineofCLIP-tagformingastablethioetherbond.AlthoughCLIP-tagisbasedonthesameproteinasSNAP-tag,thebenzylcytosinesubstratesformaseparateclassofsubstrates,differentfromthebenzylcytosinesubstratesformaseparateclassofsubstrates,differentfromthebenzylguaninesubstratesrecognizedbySNAP-tag.CLIP-tagandSNAP-tag®canbeusedfororthogonalandcomplementarylabelingoftwoproteinssimultaneouslyinthesamecells.
Therearetwostepstousingthissystem:subcloningandexpressionoftheproteinofinterestasaCLIP-tagfusion,andlabelingofthefusionwiththeCLIP-tagsubstrateofchoice.ExpressionofCLIP-tagfusionproteinsisdescribedinthedocumentationsuppliedwithCLIP-tagplasmids.ThelabelingofthefusionproteinsonthecellsurfacewiththeCLIP-tagsubstrateisdescribedinthisdocument.
Figure1:LiveCHO-K1cellstransientlytransfectedwithpCLIP-NK1R CellswerelabeledwithCLIP-Surface547(red)for60minutesandcounterstainedwithHoechst33342(blue). Figure2: Excitation(dottedline)andemission(fullline)spectraofCLIP-Surface547coupledtoCLIP-taginbufferatpH7.5 Figure3. StructureofCLIP-Surface547(MW851.0g/mol)Notes: Storage:CLIP-Surface547shouldbestoredat-20°C(longterm)orat4°Cinthedark(shortterm,lessthan4weeks).Protectthesubstratefromlightandmoisture.Withproperstorageat-20°Cthesubstrateshouldbestableforatleastthreeyearsdryor3monthsdissolvedinDMSO.
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