Description: SNAP-Cell®FluoresceinisagreenfluorescentsubstratethatcanbeusedtolabelSNAP-tag®fusionproteinsinsidelivingcellsor
invitro .Thiscell-permeablesubstrate(BG-Fluorescein)isbasedondiacetylfluoresceinandissuitableforstandardfluoresceinfiltersets.Diacetylfuoresceinisessentiallynon-fluorescent,butitbecomesfluorescentinsidethecellwhenitishydrolyzedbynon-specificesterases, yieldingfluorescein.Ithasanexcitationmaximumat500nmandanemissionmaximumat532nm.Thissubstratehaslimitedphotost
ABI lity.Ifthispresentsaproblem,werecommendusingSNAP-Cell505,whichhassimilarspectralcharacteristicsbutmuchgreaterphotostability.Thispackagecontains50nmolofSNAP-CellFluoresceinsubstrate,sufficienttomake10mlofa5µMSNAP-tagfusionproteinlabelingsolution.
TheSNAP-tagproteinlabelingsystemenablesthespecific,covalentattachmentofvirtuallyanymoleculetoaproteinofinterest.TheSNAP-tagisasmallproteinbasedonmammalianO
6 -alkylguanine-DNA-alkyltransferase(AGT).SNAP-tagsubstratesarederivativesofbenzylpurinesandbenzylchloropyrimidines,Inthelabelingreaction,thesubstitutedbenzylgroupofthesubstratebecomescovalentlyattachedtotheSNAP-tag.
Therearetwostepstousingthissystem:sub-cloningandexpressionoftheproteinofinterestasaSNAP-tagfusion,andlabelingofthefusionwiththeSNAP-tagsubstrateofchoice.ExpressionofSNAP-tagfusionproteinsisdescribedinthedocumentationsuppliedwithSNAP-tagplasmids.ThelabelingoffusionproteinswiththeSNAP-tagsubstrateisdescribedbelow.
Figure1:LiveCHO-K1cellstransientlytransfectedwithpSNAP-H2B CellswerelabeledwithSNAP-CellFluorescein(green)for15minutes. Figure2: Excitation(dottedline)andemissionspectraofSNAP-CellFluorescein(fluorescentproductofSNAP-CellFluoresceinincells)coupledtoSNAP-taginbufferatpH7.5) Figure3: StructureofSNAP-CellFluorescein(MW712.7g/mol)Notes: Storage:SNAP-CellFluoresceinshouldbestoredat-20°C(longterm)orat4°Cinthedark(shortterm,lessthan4weeks).Protectthesubstratefromlightandmoisture.Withproperstorageat-20°Cthesubstrateshouldbestableforatleast3yearsdryor3monthsdissolvedinDMSO.
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