Description: SNAP-Cell®
TMR-StarisaredfluorescentsubstratethatcanbeusedtolabelSNAP-tag®fusionproteinsinsidelivingcells,oncellsurfaces,or
invitro .Thiscell-permeablesubstrate(CP-6-TMR)isbasedonthesingleisomer6-carboxytetramethylrhodamineandissuitableforstandardrhodaminefiltersets.Ithasanexcitationmaximumat554nmandanemissionmaximumat580nm.Thispackagecontains30nmolofSNAP-CellTMR-Starsubstrate,sufficienttomake10mlofa3µMSNAP-tagfusionproteinlabelingsolution.
TheSNAP-tagproteinlabelingsystemenablesthespecific,covalentattachmentofvirtuallyanymoleculetoaproteinofinterest.TheSNAP-tagisasmallproteinbasedonmammalianO
6 -alkylguanine-DNAalkyltransferase(AGT).SNAP-tagsubstratesarederivativesofbenzylpurinesandbenzylchloropyrimidines.Inthelabelingreaction,thesubstitutedbenzylgroupofthesubstrateiscovalentlyattachedtotheSNAP-tag.
Therearetwostepstousingthissystem:subcloningandexpressionoftheproteinofinterestasaSNAP-tagfusion,andlabelingofthefusionwiththeSNAP-tagsubstrateofchoice.ExpressionofSNAP-tagfusionproteinsisdescribedinthedocumentationsuppliedwithSNAP-tagplasmids.ThelabelingofthefusionproteinswiththeSNAP-tagsubstrateisdescribedbelow.
Figure1: LiveCOS-7expressingmitochondrialcytochromeoxidase8A-SNAP(COX8A-SNAP)werelabeledwithSNAP-CellTMR-Star(red).NucleiwerecounterstainedwithHoechst33342(blue).Figure2: Excitation(dottedline)andemissionspectraofSNAP-CellTMR-StaraftercouplingtoSNAP-taginbufferatpH7.5 Figure3: StructureofSNAP-CellTMR-Star(MW677.1g/mol) Notes: Storage:SNAP-CellTMR-Starshouldbestoredat-20°C(longterm)orat4°Cinthedark(shortterm,lessthan4weeks).Protectthesubstratefromlightandmoisture.Withproperstorageat-20°Cthesubstrateshouldbestableforatleastthreeyearsdryor3monthsdissolvedinDMSO.WhilethemajorityofSNAP-tagsubstratesarebenzylguaninederivatives,theSNAP-tagisalsoabletorecognizechloropyrimidinederivatives.SNAP-CellTMR-Starisonesuchexample.
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