主页工具和资源使用指南从酵母中纯化 RNA 的指南从酵母中纯化 RNA 的指南新鲜或冷冻酵母样品可以使用君主总 RNA 小量提取试剂盒 (NEB #T2010) 进行处理。使用适量的起始材料。酵母样品的最大输入量为 5 x 107 个细胞。使用过多的样品可能会降低裂解效率,引入过量的细胞成分而不是 RNA,并损害 RNA 与 RNA 纯化柱的结合。在样品破碎和均质化之前,应沉淀液体培养中生长的细胞并去除所有培养基。机械建议使用珠子均质器进行裂解/均质化。或者,可以用聚糖酶(例如,酶解酶)酶促裂解酵母。可在产品手册中找到机械或酶促裂解方案。务必使用 1X Monarch DNA/RNA 保护试剂溶液。 (NEB #T2011) 2X 浓缩物可用无核酸酶 w 稀释ater.Keep frozen sample frozen 直到与 DNA/RNA Protection Reagent 混合。添加保护试剂后,立即进行机械裂解(例如珠子均质化)非常重要。如有必要,将样品在保护试剂中短暂放置在冰上,直到它们可以被处理。添加君主 RNA 裂解缓冲液 (NEB #T2012) 和所有后续步骤应在室温下进行。处理酵母样品不需要蛋白酶 K 消化。当处理更高的样品输入量(即 5 x 106 – 5 x 107 个细胞)时,需要更大体积的 DNA/RNA 保护试剂。因此,还需要更大体积的 RNA 裂解缓冲液和乙醇,并且必须重新加载柱子。为减少样品体积和柱子的重新加载,RNA 裂解缓冲液可用于机械裂解而不是 DNA/RNA 保护试剂

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使用以下方法成功纯化 RNA 的一般指南Monarch 总 RNA 小量提取试剂盒Guidan关于使用 Monarch 总 RNA 小量制备试剂盒时选择样品输入量的重点 RNA 纯化故障排除指南主页工具和资源使用指南全血 RNA 纯化指南全血 RNA 纯化指南The Monarch Total RNA Miniprep Kit (NEB #T2010) 可用于处理新鲜和冷冻血液。使用标准方案,最多可处理 200 µl 血液.可以修改协议,以便在单个色谱柱上处理多达 3 毫升的血液(或 1 毫升的啮齿动物血液),并适当缩放试剂并重新加载色谱柱。对于啮齿动物全血,最大样品输入量为1 毫升。对于处理全血,确保使用 Monarch DNA/RNA 保护试剂 (NEB #T2011) 作为 2X 浓缩液。使用未储存在稳定试剂中的冷冻血液时,在室温下快速解冻如方案中所示,存在 2X Monarch DNA/RNA 保护试剂(涡旋或混合)。对于先前储存在 DNA/RNA 保护试剂中的冷冻全血,让样品平衡 to 处理前室温。将全血与 DNA/RNA 保护试剂混合后,在室温下执行所有后续步骤。全血方案中不使用 RNA 裂解缓冲液。全血样本在与提供的 2X Monarch DNA/RNA 保护试剂浓缩液混合后被裂解。蛋白酶 K 处理后将异丙醇添加到血样混合物中,为 RNA 结合 RNA 纯化柱创造有利的结合条件。您将跳过 gDNA移除柱步骤并向流穿液中添加乙醇,而是将异丙醇-样品混合物直接加载到 RNA 纯化柱上。建议使用可选的柱上 DNase I 处理来去除基因组 DNA。

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使用君主总 RNA 小量制备试剂盒成功纯化 RNA 的一般指南选择样品输入量的指南使用 Monarch Total RNA Miniprep Kit 时的 RNA 提取和纯化指南 fr全血样本

产品描述

1BL21源增强型菌株

2)最高水平的表达控制

3miniF因子上同时含有laclq和溶菌酶

4)无需Cam

5)菌落快速培养

6)无动物来源产品

7)抗 T1 噬菌体感染(fhuA2

概述:T7 表达 lysY/Iq E.coli 感受态细胞适用于高效级转化及蛋白表达。

基因型:MiniF lysYlacIq(CamR) / fhuA2 lacZ::T7gene1[lon] ompT gal sulA11 R(mcr-73::miniTn10--TetS)2 [dcm]R(zgb-210::Tn10--TetS) endA1 Δ(mcrCmrr)114::IS10

特性:1)在 lac 操纵子上有 T7 RNA 聚合酶,无 λ 前噬菌体

2)通过 lacIq 精确控制表达,从而允许克隆潜在的毒性基因

3)通过溶菌酶对 T7 RNA 聚合酶进行调控,从而允许克隆潜在的毒性基因

4LysY 作为特殊的 T7 溶菌酶,因缺少酰胺酶活性从而降低细胞在诱导过程中的溶菌现象

5Lon OmpT 蛋白酶缺失

6)不受限于 DNA 是否甲基化

转化效率:

高效级:0.61 x 109 cfu/μg pUC19 DNA

未被转化的细胞需要检测抗 Φ80 噬菌体感染的能力,这是检测抗 T1 噬菌体感染能力的标准检测法。此外,未转化细胞还要检测其对氨苄青霉素、四环素、卡那霉素和链霉素的敏感性。结果显示未被转化的该感受态细胞抗氯霉素。

随产品提供:

20ml SOC Outgrowth 培养基(室温贮存)

0.025 ml 50 pg/μl pUC19 对照 DNA(–20°C 贮存)

注意事项:感受态细胞应贮存于 –80°C,一旦融化,就不能再被冻存。 –20°C 贮存会显著降低其转化效率。只要温度高于 –80°C,即使未被融化,细胞转化效率也会降低为零。