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大多数等温扩增专注于诊断检测，使用非常短的产物快速识别目标序列。这些方法功能强大且有用，但范围有限，因为我们展望超长读长测序和合成生物学的未来，其中需要控制生产超长 DNA 分子。我们正在利用新的酶活性、生物有机体的复制系统，以及我们在等温化学方面的专业知识，努力实现长 DNA 的未来。

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如本文所述，使用 Bsu 聚合酶和 gp32 对长 DNA 产物进行等温扩增。

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产品描述

特性

将 5 预腺苷化的 DNA 或 RNA 连接到任何 RNA 3 末端

将单链腺苷化引物连接至小 RNA 上，用于 cDNA 克隆文库构建

将单链腺苷化引物连接至 RNA 上，用于链特异 cDNA 文库构建

概述T4  RNA  连接酶 2 ，截短型（T4 RNL2  截短型）可特异性地将 DNA   或 RNA   的预腺苷酰化 5´ 末端连接到 RNA 3´  末端。该酶连接时不需要 ATP ，但需要预腺苷酰化底物。T4 RNL2  截短型的表达来自 E. coli  质粒，该质粒编码 T4 RNA  连接酶 2  基因的前  249  个氨基酸。与全长的 T4 RNA  连接酶 2 不同，T4 RNL2  截短型不能将底物的 5´  末端腺苷酰化，因此无法将 RNA  或 DNA  的 5´  磷酸末端连接到 RNA 3´ 端 （1-3） 。该酶，即 RNL2 （1-249），可用于 microRNA  克隆中接头连接的优化，因为此酶只能利用腺苷酰化的引物，因此，可以降低连接背景  （4-6）。

来源携带 T4 RNA 连接酶 2 截短型基因的重组 E.coli  菌株。

反应条件1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃) ，10 mM MgCl2，1 mM DTT]，25℃ 温育。

随酶提供试剂10X T4 RNA 连接酶反应缓冲液

50% PEG 8000

质保声明无单链和双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 以及磷酸酶的污染。

单位定义200 单位指 10 μl 反应体系中，25℃ 条件下，1 小时将 80% 的 31-mer RNA 连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [通用 miRNA 克隆接头 (NEB#S1315) ] 所需的酶量。

 

5´-FAM-    rArGrUrCrGrUrArGrCrCrUrUrUrArUrCrCrGrArGrArUrUrCrArGrCrArArUrA-3´

5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´

浓度200,000 units/ml。

热失活 65℃ 加热 20 分钟。