HomeResearch LabsSchildkraut LabSchildkraut LabmRNA 脱帽 mRNA 脱帽

真核生物 mRNA 在转录早期通过添加 N7-甲基鸟苷 (m7G) 在其 5\' 末端进行修饰，它在第一个 5\' 核苷酸上形成\"帽”。鉴定 mRNA 上的 5\' 核苷酸对于确定转录起始位点 (TSS) 是必要的。我们探讨了各种反应条件对酵母清道夫 mRNA 脱帽酶 DcpS 活性的影响，并检查了 30 种化学上不同的帽结构的脱帽，这些帽结构改变了 25mer RNA 寡核苷酸的甲基化状态、糖、磷酸键和碱基组成。与普遍接受的 DcpS 酶仅去除短寡核苷酸的观点相反，我们发现酵母清道夫去除酶去除长达 1400 个核苷酸的 RNA 转录物。此外，我们使用专门标记 t 的策略验证了 yDcpS 在富集加帽 RNA 方面的应用加帽 RNA 的 5\' 端，首先脱帽，然后用亲和标记的鸟苷核苷酸重新加帽。

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yDcpS 的去帽特性。有效去盖的合成帽模拟基板以绿色阴影显示，抗去盖（小于 10%）的基板以粉红色阴影显示。粗体字符的底物表示规范的帽结构。图来自 Wulf 等人。 2019.

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产品描述

特性

耐热性好

可在 PCR 和连接酶链式反应过程中掺入磷酸化寡核苷酸

可用连接酶检测反应和连接酶链式反应对等位基因进行特异性检测（1，3）

可通过 PCR 扩增掺入磷酸化寡核苷酸进行诱变（4）

概述Taq DNA 连接酶能够催化磷酸二酯键的形成，使杂交到同一互补靶 DNA 链上的两条契合寡核苷酸链的 5´-磷酸末端和 3´-羟基末端通过磷酸二酯键连接。这个连接反应只有当两条寡核苷酸链与互补靶 DNA 完全配对并且两条寡核苷酸链之间没有空隙的条件下才可发生。因此，可以用它来检测单碱基替换。在 45℃-65℃ 范围内，Taq DNA 连接酶均有活性 （1,2）  。

来源重组 E. coli  菌株，含有从 Thermus aquaticus HB8 中克隆的连接酶基因(1) 。

反应条件1X Taq DNA 连接酶反应缓冲液 [20 mM Tris-HCl（pH 7.6 @ 25 ℃），25 mM KAc，10 mM Mg(Ac)2，10 mM DTT，1 mM NAD 和 0.1% Triton X-100]，45 ℃ 温育。

 

本酶需 NAD+ 作辅因子，NAD+ 已被添加在 10X Taq DNA 连接酶缓冲液中；

 

为了延长 NAD+ 的半衰期，缓冲液应于 -70℃ 贮存。

质保声明Taq DNA 连接酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。

单位定义（粘性末端活性单位）

1 单位是指在 50 μl 反应体系中，45 ℃ 反应条件下，15 分钟能使 50% 的 12 bp 粘性末端片段发生连接所需要的酶量。12 bp 粘性末端来自于 BstEII 消化 1 μg λDNA。

浓度40,000 units/ml。

热失活无。